TMB Chromogen Solution (HRP-based Elisa)

TMB顯色液（Elisa HRP顯色用）

產品簡介：

TMB（3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine）是辣根過氧化物酶（HRP）的常用顯色底物之一。在HRP的催化下，TMB被H2O2氧化生成藍色產物。主要吸收峰在370nm和652nm。在加入硫酸或者磷酸終止上述反應后，產物轉變為黃色，*大吸收峰為450 m。傳統的TMB顯色試劑通常以AB液形式提供（TMB和H2O2溶液分到兩管，使用前才可混合使用），并且容易產生沉淀，使用起來相對不方便，且容易導致操作誤差。為克服以上缺點，我們采用*新的TMB顯色技術，將所有相關試劑混合配成單一溶液，本產品具有以下特點：

1. 即開即用，操作簡單，使用前無需做AB液混合的準備；檢測靈敏度不低于AB液體系；

2. 僅由單一溶液組成，簡化了操作步驟，也降低了操作誤差，結果更加穩定；

3. 含有*的穩定劑，保證溶液4℃下長期保存；

4. 相比于其他HRP酶顯色底物（如ABTS和OPD）相比，檢測靈敏度更高，而且本TMB溶液不含有DMF或DMSO等有機溶劑，安全無毒。

本品為單一溶液形式且沉淀可溶型的TMB顯色液，適用于ELISA檢測，操作時只需加入200μl即用型的顯色液，做簡單孵育，加入2M H2SO4終止反應后，即可用分光光度計在450nm處測定吸光度。本品可供完成約500個樣品的檢測。另外，本品也可用于血液或血紅蛋白等樣品中過氧化物酶量的檢測。

使用方法：

1．使用之前，取出適量單組份TMB顯色液，使其回到室溫再開始使用。

2．對于ELISA檢測：參考ELISA 檢測試劑盒的實驗步驟，當加入HRP標記的抗體并孵育一段時間后，用適當洗滌液洗滌3-5次，每次3-5min。洗滌完畢后，去除洗滌液，加入200μl TMB顯色液；對于在96孔板內進行的其他適當檢測（如檢測組織或細胞樣品內源性過氧化物水平）：直接在96孔板內加入10-20μl樣品，之后加入200μl TMB顯色液。

3．室溫避光孵育3-30min或更長時間（可長達24h），直至顯色至預期深淺（此時反應液為藍色）。

4．加入50μl 2M H₂SO₄終止反應，溶液由藍色轉變為黃色，隨后在450nm測定吸光度。或著在370nm或652nm測定吸光度。

常見問題：

一. 背景顯色太深

1．如果背景（沒有樣品的對照）顯色太深，一方面需考慮使用適當的封閉液進行封閉，如商業化的封閉液或者商業化的和一抗相同來源的血清（5-10%）進行封閉。另一方面，直接使用經過適當親和吸附的二抗，以減小二抗的非特異性交叉吸附。

2．可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗濃度。另外，選擇適當強度的洗滌液，或延長洗滌時間。

3．可考慮TMB底物本身反應過于強烈。為了避免沉淀的產生，可在終止反應后馬上讀數，或者進一步稀釋一抗和HRP結合物。 _

二. 沒有顯色或顯色太弱

1．適當提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在離心管內，檢測二抗是否被正常顯色。

2．可以使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生物素檢測體系。

3．可以適當延長顯色時間。

4．如果上述改進不能獲得預期效果，可以考慮更換效果更好的一抗或ELISA

注意事項：

1、TMB對人體有刺激性，操作時請小心，并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內。

2、本產品為無色至微藍色透明溶液，如果發現TMB顯色液出現混濁或顏色變成較深的藍色，應該停止使用。

3、本產品*限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：

4℃避光保存，有效期一年。