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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：DNA損傷/斷裂分析試劑盒
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：100T
發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹：
哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，雙鏈斷裂（DSB）的基因組DNA 是一種潛在的致命病變。現(xiàn)已確知DSB 的形成為導(dǎo)致H2A 組蛋白的磷酸化。具體來說，在DNS 雙鏈斷裂處形成DNA 灶的過程中，DNA 損傷誘導(dǎo)劑可以誘導(dǎo)組蛋白變體H2AX 的在Ser139 位點(diǎn)上的磷酸化。磷酸化的H2AX 有利于募集蛋白質(zhì)從而幫助DSB 部位進(jìn)行修復(fù)。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，磷脂酰肌醇3-激酶樣蛋白激酶，如ATM，ATR、DNA-PKCs 蛋白，以及磷酸化的組蛋白變體，H2AX。 我司DNA 損傷試劑盒通過高內(nèi)涵分析可以對于同一細(xì)胞的健康參數(shù)、遺傳毒性和細(xì)胞毒性進(jìn)行同時(shí)定量分析。通過以磷酸化的H2AX（Ser139）抗體檢測DNA 損傷，可以對遺傳毒性進(jìn)行分析，進(jìn)而反映DNA 損傷情況。而細(xì)胞毒性的分析是通過試劑盒提供的死活細(xì)胞核染料進(jìn)行染色區(qū)分鑒定的。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
野鼠色基因相關(guān)蛋白(AGRP)英文名稱：AGRP ELISA Kit鈣調(diào)調(diào)節(jié)蛋白相關(guān)蛋白抗體包裝1g
巖藻糖基轉(zhuǎn)移8(FUT8)英文名稱：FUT8 ELISA Kit緊密連接蛋白1抗體包裝250mg
煙酰胺腺嘌呤二核苷磷(NAADP)英文名稱：NAADP ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框149抗體包裝1g
亞硫鹽氧化(SUOX)英文名稱：SUOX ELISA Kit磷化原癌基因c-kit抗體包裝250mg
血幼(HJV)英文名稱：HJV ELISA Kit磷化原癌基因c-kit抗體包裝1g
血小板因子4(PF4)英文名稱：PF4 ELISA Kit磷化淋巴衍生C-型凝集抗體包裝250mg
血小板衍生生長因子受體樣蛋白(PDGFRL)英文名稱：PDGFRL ELISA Kit2號(hào)染色體開放閱讀框39抗體包裝5g
血小板衍生生長因子C(PDGFC)英文名稱：PDGFC ELISA Kit2號(hào)染色體開放閱讀框49抗體包裝1g
血小板衍生生長因子B(PDGFB)英文名稱：PDGFB ELISA Kit2號(hào)染色體開放閱讀框50抗體包裝250mg
血小板衍生生長因子A(PDGFA)英文名稱：PDGFA ELISA Kit科凱恩氏綜合癥相關(guān)蛋白/早衰蛋白CSA抗體包裝5g
血小板激活因子乙酰解2(PAFAH2)英文名稱：PAFAH2 ELISA Kit磷化角蛋白8抗體包裝100g
血小板激活因子(PAF)英文名稱：PAF ELISA Kit磷化角蛋白8抗體包裝25g
血小板反應(yīng)蛋白4(THBS4)英文名稱：THBS4 ELISA Kit磷化角蛋白18抗體包裝5g
血小板反應(yīng)蛋白3(THBS3)英文名稱：THBS3 ELISA Kit胞粘蛋白2抗體包裝5ml
血小板反應(yīng)蛋白2(THBS2)英文名稱：THBS2 ELISA Kit色CPA6抗體包裝1g
ADP核糖基化因子5抗體白介1家族成員9(IL1F9)N/A
DNA損傷/斷裂分析試劑盒多主葡萄殼 2-氯喹噁啉衰老關(guān)鍵蛋白1檢測試劑盒
短密青霉 四氟鋁酸雙酚A檢測試劑盒
黑曲霉 2,6-二氯-3-硝基吡啶雙氫睪酮檢測試劑盒
香菇 2-基-4,5-咪唑二羧酸二乙酯雙糖鏈蛋白聚糖檢測試劑盒
黑曲霉 7-氯-1,2,3,4-四氫苯并[B]氮雜卓-5-酮水通道蛋白1檢測試劑盒
釀酒酵母 3-溴-2-氟三氟甲苯水通道蛋白2檢測試劑盒
梨輪紋病 4-(氨甲基)苯鹽酸鹽水通道蛋白4檢測試劑盒
枯草芽孢桿 N-甲基-4-酮水通道蛋白4抗體檢測試劑盒
草分枝桿 Fmoc-N'-乙酰基-L-賴氨酸水通道蛋白5檢測試劑盒
線殼囊孢(座線孢) 2-氨基-5-嘧啶水通道蛋白6檢測試劑盒
百脈根中間根瘤 (S)-2-芴甲氧羰基氨基己二酸 6-叔丁酯絲氨酸檢測試劑盒
煙色齒耳 4-雙苯酸頻那酯絲氨酸;蘇氨酸蛋白激酶B-raf檢測試劑盒
櫟 2-氨基-6-氟吡啶絲氨酸;蘇氨酸蛋白磷酸酶檢測試劑盒
反硝化鹽單胞 對基苯乙酮絲裂原活化蛋白激酶1檢測試劑盒
薄層屬 4-甲氧基-1-萘甲絲裂原活化蛋白激酶3檢測試劑盒
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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